แหยม ยโสธร 2 เป็นภาคต่อของภาพยนตร์ตลกยอดฮิตในสไตล์ลูกทุ่งไทย ผลงานการกำกับและแสดงนำโดย หม่ำ จ๊กม๊ก ที่กลับมาพร้อมเรื่องราวความฮาและวุ่นวายในท้องทุ่งอีกครั้ง คราวนี้เล่าเรื่องราวที่เกิดขึ้นหลังจากภาคแรกผ่านไป 20 ปี1
20 ปีผ่านไป บักแหยม (หม่ำ จ๊กม๊ก) และ อีเจ้ย (เจเน็ต เขียว) คู่รักที่เคยสร้างตำนานความรักสุดชุลมุนในภาคแรก ตอนนี้ได้สร้างครอบครัวใหญ่จนมีลูกถึง 12 คน ลูกๆ ส่วนใหญ่ได้เติบโตและแต่งงานมีครอบครัวไปแล้ว แต่ อีแว่ (บุษราคัม วงษ์คำเหลา) ลูกสาวคนสวย และ บักคำผาน (เพทาย วงษ์คำเหลา) ลูกชายคนเล็ก ยังคงอยู่กับพ่อแม่ในฐานะแก้วตาดวงใจ

กำนันแหยม ผู้ที่ตอนนี้กลายเป็นบุคคลสำคัญและทรงอิทธิพลในตำบล มีความหวงลูกสาวและลูกชายอย่างมาก โดยเฉพาะ อีแว่ ที่สวยจนหนุ่มๆ ในหมู่บ้านหรือใครก็ตามไม่กล้าคิดจะจีบ เพราะกลัวฤทธิ์เดชของกำนันแหยม

แต่แล้วฟ้าเบื้องบนกลับเหมือนเล่นตลก ส่ง ปลัดธนู (รับบทโดยดารารับเชิญ) หนุ่มหล่อไฟแรง ผู้มารับตำแหน่งใหม่ในตำบลยโสธร เข้ามาในชีวิตครอบครัวของกำนันแหยม และดูเหมือนปลัดหนุ่มจะมีความสนใจในตัวอีแว่ ทำให้กำนันแหยมต้องหาทางขัดขวางอย่างสุดความสามารถ

ในขณะเดียวกัน บักคำผาน ลูกชายคนเล็กผู้ไม่ยอมโตเต็มที่ กลับมีเรื่องราววุ่นๆ ที่สร้างเสียงหัวเราะไม่ขาดสายให้กับคนในครอบครัวและหมู่บ้าน